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第一章 引言1

1 蜜蜂在农业中的地位1

1.1 蜜蜂在农业增产中的重要作用1

1.2 蜜蜂在农业可持续发展中的作用2

1.3 我国养蜂业在世界的地位3

2 化学农药与蜜蜂4

2.1 农药对蜜蜂毒性的生物测定5

2.2 亚致死剂量杀虫剂对蜜蜂的影响10

3 东方蜜蜂和西方蜜蜂的比较研究18

4 蜜蜂的解毒酶研究进展19

4.1 蜜蜂乙酰胆碱酯酶研究20

4.2 蜜蜂羧酸酯酶研究22

4.3 蜜蜂谷胱甘肽硫转移酶研究23

4.4 蜜蜂多功能氧化酶研究26

5 研究目的和意义30

5.1 研究目的30

5.2 研究意义30

第二章 蜜蜂羧酸酯酶的最适反应条件的测定31

1 材料与方法31

1.1 试剂31

1.2 试虫来源31

1.3 酶源制备32

1.4 CarE活性测定方法32

1.5 蛋白质含量测定32

1.6 实验设计32

2 结果与分析33

2.1 正交试验结果的极差分析33

2.2 正交试验结果的方差分析34

2.3 试验因子各水平间的差异显著性比较35

3讨论36

第三章 蜜蜂解毒酶系的体躯与亚细胞分布研究38

1 材料与方法39

1.1 试虫39

1.2 试剂及仪器39

1.3 AchE、CarE和GST在蜜蜂体躯的分布39

1.4 AchE、CarE和GST的亚细胞分布39

1.5 AchE活性测定40

1.6 CarE活性测定41

1.7 GST活性测定41

1.8 可溶性蛋白质含量测定42

2 结果与分析42

2.1 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同组织AchE活性42

2.2 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同组织CarE活性44

2.3 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同组织GST活性45

2.4 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同亚细胞层AchE活性47

2.5 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同亚细胞层CarE活性48

2.6 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同亚细胞层GST活性48

3 讨论49

第四章 蜜蜂发育期解毒酶系变化的研究55

1 材料与方法55

1.1 试虫55

1.2 试剂及仪器56

1.3 酶源提取与制备56

1.4 AchE活性测定56

1.5 CarE活性测定57

1.6 GST活性测定57

1.7 可溶性蛋白质含量测定57

2 结果与分析57

2.1 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同虫态AchE活性57

2.2 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同发育期CarE活性58

2.3 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同发育期羧酸酯酶Km测定59

2.4 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同发育期GST活性测定60

2.5 西方蜜蜂成年工蜂不同日龄的AchE活性变化61

2.6 西方蜜蜂成年工蜂不同日龄的羧酸酯酶活性变化62

2.7 西方蜜蜂成年工蜂不同日龄的谷胱甘肽硫转移酶活性变化63

2.8 不同蜂种AchE活性比较63

2.9 不同蜂种CarE活性比较64

2.10 不同蜂种GST活性比较65

3 讨论66

第五章 化学农药对蜜蜂解毒酶系的影响研究71

1 材料与方法72

1.1 试虫72

1.2 试剂、化学药剂及仪器72

1.3 农药对蜜蜂的毒性测定73

1.4 亚致死剂量化学药剂对蜜蜂的影响样品取样73

1.5 酶源提取与制备74

1.6 AchE活性测定74

1.7 CarE活性测定74

1.8 GST活性测定74

1.9 化学农药对蜜蜂CarE的离体抑制测定74

1.10 可溶性蛋白质含量测定75

2 结果与分析75

2.1 东方蜜蜂和西方蜜蜂对5种化学药剂的敏感性比较75

2.2 5种亚致死剂量的化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的AchE活性影响76

2.3 5种亚致死剂量的化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的CarE活性影响80

2.4 5种亚致死剂量的化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的GST活性影响83

2.5 5种化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的CarE离体抑制作用87

3 讨论89

第六章 总结93

1 总结93

2 本研究的创新之处95

3 讨论95

参考文献97