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1实验室规则1

2预习报告要求1

第一篇 生物化学实验室规则及基本操作1

3实验记录要求2

4实验报告书写要求及参考格式2

4.1 实验报告的格式2

4.2实验报告的内容3

4.3 实验结果3

5仪器的清洗与清洁3

5.1 初用玻璃仪器的清洗3

5.2使用过的玻璃仪器的清洗3

6清洗液的作用原理及配制4

6.2其他洗涤液4

6.1 洗液的配制4

5.5玻璃和塑料器皿的干燥4

5.4 塑料器皿的清洗4

5.3 石英和玻璃比色皿的清洗4

7移液器的种类和使用5

7.1 滴管5

7.2 移液管（吸管）5

7.3微量进样器5

7.4 自动取液器6

8定量容器的种类和使用7

8.1 量筒、量杯7

8.2 容量瓶7

10.1磷酸盐缓冲液8

9.3 弹打式8

10生物化学常用缓冲液的配制8

9.1 搅拌式8

9溶液的混匀8

9.2 旋转式8

10.2 Tris缓冲液9

10.3有机酸缓冲液9

10.4硼酸盐缓冲液10

10.5氨基酸缓冲液10

10.6 两性离子缓冲液10

11实验室意外情况及处理措施10

11.1 着火10

11.2 爆炸11

11.3 中毒12

11.4 外伤12

11.5 触电13

1.1 机械破碎14

1.2 物理破碎14

1破碎技术14

第二篇 基本生化实验技术14

1.3化学与生物化学破碎15

2萃取技术15

2.1 液－液萃取15

2.2 液－固萃取16

2.3超临界流体萃取16

2.4反胶束萃取法18

2.5双水相分离技术21

3沉淀和结晶技术22

3.1 沉淀22

3.2 结晶26

4浓缩与干燥技术30

4.1 浓缩技术30

4.2 干燥技术30

5.1 紫外和可见光光谱36

5分光光度技术36

5.2荧光光度分析43

5.3原子吸收光谱44

6电泳技术46

6.1 电泳技术总论46

6.2 纸电泳和乙酸纤维薄膜电泳50

6.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳51

6.4琼脂糖凝胶电泳56

6.5免疫电泳技术56

6.6 等电聚焦电泳58

6.7毛细管电泳59

6.8 电泳结果处理62

7层析技术64

7.1层析技术概述64

7.2 凝胶层析71

7.3 离子交换层析79

7.4 亲和层析84

7.5具体的一些层析方法91

7.6 高效液相色谱94

8离心技术104

8.1 离心原理104

8.2 离心技术的类型105

8.3离心机类型106

9 PCR技术109

9.1 PCR基本原理109

9.2 PCR的基本过程109

9.3 PCR实验技术要点110

9.4 提高PCR扩增特异性111

10膜分离技术112

10.1 透析113

10.2 超滤114

11免疫技术——酶联免疫吸附测定法（ELISA）115

11.1原理115

11.2操作要点115

12生物大分子制备技术119

12.1概述119

12.2 生物大分子制备的前处理121

12.3 生物大分子的分离纯化123

12.4样品的保存124

第三篇 实验部分126

糖类实验126

实验一 还原糖和总糖的测定（3，5－二硝基水杨酸法）126

实验二 可溶性总糖的蒽酮比色法测定127

实验三 费林试剂法测定总糖128

实验四 磷钼酸比色法测定血糖130

实验五 黏多糖——肝素钠效价的测定133

实验六 淀粉的提取及性质实验134

实验七 淀粉与纤维素的测定136

实验八 肝糖原的提取及鉴定139

实验九 果胶的提取与胶冻的制备140

实验十 可溶性糖的硅胶G薄层层析141

实验十一 糖的聚酰胺薄层层析142

实验十二 细菌细胞壁糖的薄层层析143

实验十三 葡萄糖－1－磷酸的制备及其纯度的测定147

脂类实验149

实验十四 脂肪的碱水解及组分鉴定149

实验十五 粗脂肪的定量测定——索氏抽提法151

实验十六 皂化值的测定152

实验十七 酸值的测定153

实验十八 碘值的测定154

实验十九 卵磷脂的提取及鉴定156

实验二十 磷硫铁法测定血清胆固醇158

实验二十一 分光光度法测定胆红素（改良J-G法）159

实验二十二 红细胞膜的制备及其成分分析（磷脂、胆固醇）160

氨基酸和蛋白质类实验164

实验二十三 氨基酸的纸层析164

实验二十四 薄层层析法分离氨基酸166

实验二十五 甲醛滴定法测定氨基酸167

实验二十六 华勃氏呼吸计法测定L－谷氨酸169

实验二十七 旋光法测定谷氨酸172

实验二十八 蛋白质的沉淀反应、颜色反应、两性反应、电荷及等电点的测定173

实验二十九 粗蛋白的定量测定——微量凯氏定氮法178

实验三十 紫外光吸收法测定蛋白质含量181

实验三十一 双缩脲法测定蛋白质含量183

实验三十二 考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）测定蛋白质含量184

实验三十三 Folin－酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质186

实验三十四 尿素对蛋白质的变性作用187

实验三十五 蛋白质DNS分析法（DNS—Cl膜层析技术）189

实验三十六 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质190

实验三十七 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质192

实验三十八 等电聚焦电泳测定蛋白质等电点194

实验三十九 SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量196

实验四十 凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量198

实验四十一 酪蛋白的提取200

实验四十二 植物叶蛋白的提取201

实验四十三 细胞色素C的制备及其测定203

核酸类实验207

实验四十四 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化207

实验四十五 植物组织中核酸的提取和测定209

实验四十六 酵母RNA的分离与组分鉴定211

实验四十七 DNA的琼脂糖凝胶电泳213

实验四十八 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳215

实验四十九 DNA重组216

实验五十 PCR聚合酶扩增DNA218

实验五十一 逆转录聚合酶（PCR）链反应220

酶类实验221

实验五十二 过氧化氢酶和过氧化物酶的作用221

实验五十三 温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响223

实验五十四 大麦萌发前后淀粉酶活力的比较225

实验五十五 枯草杆菌蛋白酶活力的测定227

实验五十六 转氨酶GPT、GOT活性的测定228

实验五十七 脲酶的动力学研究230

实验五十八 糖化型淀粉酶活力的测定235

实验五十九 蛋清溶菌酶的制备及活力测定236

实验六十 正交法测定对酶活力影响的几种因素238

实验六十一 碱性磷酸酶的分离与纯化241

实验六十二 结晶乳酸脱氢酶（LDH）的制备243

实验六十三 琥珀酸脱氢酶的活性测定及丙二酸的抑制作用245

实验六十四 辣根过氧化物酶的制备及酶比活力的测定246

实验六十五 发色底物测定大曲中α－葡萄糖苷酶活力250

实验六十六 酵母蔗糖酶的纯化及性质研究251

实验六十七 固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测256

实验六十八 亲和层析法纯化胰蛋白酶257

维生素类实验261

实验六十九 维生素A的测定（三氯化锑比色法）261

实验七十 还原型维生素C的测定263

实验七十一 总维生素C的测定——2，4－二硝基苯肼比色法264

实验七十二 荧光法测定维生素B2（核黄素）265

实验七十三 高效液相色谱法测定脂溶性维生素267

代谢类实验269

实验七十四 肌糖原的酵解作用269

实验七十五 发酵过程中无机磷的利用272

实验七十六 糖酵解中间产物的鉴定273

实验七十七 氨基转移反应的定性鉴定274

实验七十八 脂肪酸的β－氧化277

实验七十九 辛酸－硫酸铵法从人血清中纯化免疫球蛋白（IgG）278

其他实验278

实验八十 免疫电泳技术279

实验八十一 ELISA法测定单克隆抗体的效价281

实验八十二 分光光度法测定叶绿素含量283

附录285

附录1一些常用化合物的溶解度（20℃）285

附录2酸、碱溶液的配制285

附录3常用酸碱体积分数、相对密度和物质的量浓度的关系286

附录4某些有机溶剂的主要物理常数287

附录5一些常用酸碱指示剂287

附录6混合指示剂288

附录8染料和荧光标准试剂289

附录9生物发色团289

附录7氧化还原染料289

附录10某些重要生化物质的摩尔消光系数290

附录11氨基酸的一些物理常数291

附录12元素的相对原子质量表292

附录13调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）293

附录14调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）294

附录15气体干燥剂294

附录16液体干燥剂294

附录17易变质及需要特殊方法保存的试剂295

附录18冷却剂295

附录19常用缓冲溶液的配制296

1 0.05mol/L甘氨酸－盐酸缓冲液296

2 0.05mol/L邻苯二甲酸－盐酸缓冲液296

3 磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液296

5 0.1mol/L柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液297

6 乙酸－乙酸钠缓冲液297

4 柠檬酸－氢氧化钠－盐酸缓冲液297

7磷酸盐缓冲液（PB）298

8磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）298

9 0.05mol/L磷酸二氢钾－氢氧化钠缓冲液299

10 巴比妥钠－盐酸缓冲液（18℃）299

11 0.05mol/L Tris－盐酸缓冲液（25℃）299

12 硼酸－硼砂缓冲液（0.2mol/L硼酸根）300

13 0.05mol/L甘氨酸－氢氧化钠缓冲液300

14 硼砂－氢氧化钠缓冲液（0.05mol/L硼酸根）300

15 0.1mol/L碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液300

附录20凝胶数据表301

1 Sephadex G型交联葡聚糖凝胶的数据301

2 Sephadex G型交联葡聚糖凝胶溶胀所需时间301

3琼脂糖凝胶数据302

4 Superose的数据302

6 Bio-Gel P型号凝胶的数据303

5琼脂糖凝胶Bio-Gel A型的数据303

7交联聚苯乙烯凝胶Bio-BeadsS-X型的数据304

8制备级Superdex凝胶过滤介质的数据304

9 聚乙烯醇型凝胶Toypearl的数据304

10 各种凝胶所允许的最大操作压力305

附录21凝胶过滤用标准蛋白305

1 凝胶过滤用低分子质量标准的组成305

2凝胶过滤用高分子质量标准的组成305

3凝胶过滤用分子质量标准品306

附录22薄层层析分离各类物质常用的展层溶剂306

附录23各类物质常用的薄层显色剂307

附录24腐蚀性万能薄层显色剂308

附录25主要蛋白质的分子质量308

附录26生物化学国内外常用网址309

主要参考书310